本发明涉及乙醇高温高产工程菌株的构建及应用，具体是通过基因工程的方法将粗糙脉孢霉(Neurospora?crassa)来源的木糖还原酶基因，树干毕赤酵母(Scheffersomyces?stipitis)的木糖醇脱氢酶突变基因，以及下游的一系列基因在耐热酵母马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces?marxianus)中高效表达或敲除，使该菌株通过木糖代谢路径在较高温度(>42℃)下，能够高效地利用和发酵木糖，大量快速生产乙醇。所述酵母菌株可以在42℃的条件下，快速高效利用高浓度木糖发酵生产乙醇,产量和发酵速率都超过已报道的耐热菌株。
