本发明涉及一种从三种高山鼠尾草植物中制备迷迭香酸化学对照品的方法,该方法包括以下步骤:⑴微孔树脂除杂:粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一种醇提物用乙醇溶液溶解,过滤、上微孔树脂柱分离,先以水溶液洗脱除杂,然后用甲醇溶液进行台阶梯度洗脱,收集30%~50%甲醇水洗脱物,该甲醇水洗脱物经减压干燥得酚酸类组分粗品;⑵硅胶柱富集:将酚酸类组分粗品经硅胶柱色谱分离后洗脱,收集Rf值为0.18~0.22的馏分;馏分经减压干燥即得淡黄色粉末状的迷迭香酸粗品;⑶亲水液相制备色谱精制:迷迭香酸粗品用甲醇溶液溶解,经过滤、亲水液相制备色谱分离,收集色谱峰馏分,该色谱峰馏分经减压干燥即得白色粉末状的对照品。本发明工艺简单、易规模化。