本发明提供了一种基于双酶切的简化基因组二代测序文库构建方法及试剂盒，本发明针对现有双酶切简化基因组测序文库构建方法不足，扩展了双酶切组合范围，减少了简化基因组文库构建对贵重仪器的过分依赖，简化了建库流程，降低了建库成本（为市场成本的50%）并改善了测序效率，同时该技术操作简单灵活更容易的被科研人员掌握并能在普通的分子实验室中实现。特别适用于需要对大量参考基因组不完善的物种进行SNP分子标记开发、遗传图谱构建、群体遗传学研究及系统发育生物学研究等研究的微型或中等规模实验室。本发明在农业分子育种领域，保护生物学领域及进化生物学领域将具有良好的实际应用价值和应用前景。
