α-转移葡萄糖苷酶(α-transglucosidase E.C.2.4.1.24)可专一性地切开糖类底物中非还原端的α-1、4糖苷键,释放出葡萄糖,还可将游离出的葡萄糖残基以α-1、6糖苷键转移到另一个糖类底物上,得到非发酵性的低聚异麦芽糖(IMO,其包括异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖及四糖以上的低聚糖)、糖脂或糖肽等。该酶是工业上生产IMO的必需酶制剂之一,具有巨大的应用价值。
本技术利用黑曲霉高效表达系统,通过传统诱变的方法筛选出多分支、短分支的突变菌株。最终获得稳定性好、α-转移葡萄糖苷酶产量高的黑曲霉工程菌株,为其工业化生产奠定基础,以适应IMO生产工艺的需求。
基于黑曲霉表达系统,我们筛选得到了4株稳定、高效表达α-转移葡萄糖苷酶的生产菌株。将来源于土曲霉、棒曲霉、烟曲霉、黑曲霉的α-转移葡萄糖苷酶基因分别转化到自主构建的黑曲霉宿主菌中,获得4株黑曲霉重组菌株At、Ac、Af和An。发酵样品进行应用实验测定,测试在不同温度下生产的总糖产品中IMO的含量。结果显示Af在60度和65度条件下,均优于标杆产品。以At、Af、An为出发菌株,分别经过紫外诱变筛选及摇瓶发酵优化,最终得到3株高产α-转移葡萄糖苷酶的黑曲霉突变菌株Atm、Afm、Anm。葡萄糖苷酶的酶活分别可达14952U/ml、6699U/ml和23709 U/ml。