专利详情

专利名称	分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法
申请号	CN201310317850.X	专利类型	发明专利
公开（公告）号	CN103525712A	公开（授权）日	2014.01.22
申请（专利权）人	中国科学院广州生物医药与健康研究院	发明（设计）人	吴东海;杨松;刘月红;李侍武;徐爱民;李鹏;刘彭涛
主分类号	C12N1/19(2006.01)I	IPC主分类号	C12N1/19(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N
专利有效期	分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法至分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法	法律状态	实质审查的生效
说明书摘要	本发明公开了一种分泌表达外源蛋白的酵母转化子及其制备方法，所述方法步骤为：正向引物5’端引入XhoI，对应Kex2识别区域P1’位点分别引入20种氨基酸密码子，反向引物5’端引入NotI，得20对引物；以目标基因CDS序列cDNA或DNA为模板扩增，TA克隆得载体群P1’-CDS-pMD20-T；构建酵母真核表达载体群P1’-CDS-pPICZαA；转化载体群至酵母，筛选阳性转化子，并接到YPD平板，得相同拷贝数的转化子群甲醇诱导，分析蛋白产量，即得表达水平最高的转化子。本发明制备方法通过对Kex2的P1’氨基酸残基的优选以提高Kex2蛋白酶识别底物的活性，从而提高酵母分泌表达重组蛋白的产量。