专利详情

专利名称	表达重组人FVIII的整合质粒、细胞株及其构建方法和应用
申请号	CN201310041027.0	专利类型	发明专利
公开（公告）号	CN103215308A	公开（授权）日	2013.07.24
申请（专利权）人	中国科学院苏州生物医学院工程技术研究所	发明（设计）人	刘晓玫;张春
主分类号	C12N15/864(2006.01)I	IPC主分类号	C12N15/864(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I
专利有效期	表达重组人FVIII的整合质粒、细胞株及其构建方法和应用至表达重组人FVIII的整合质粒、细胞株及其构建方法和应用	法律状态	著录事项变更
说明书摘要	一种表达重组人FVIII的整合质粒、细胞株及其构建方法和应用。该整合质粒包括：rAAV质粒骨架，以及连接于rAAV质粒骨架内的两个ITR元件之间的B区缺失的FVIII基因。进一步的，该整合质粒中还可包含：GFP基因，用作后续细胞株的筛选标记；和/或，AAVp5启动子，用以提高整合效率。该细胞株包括经过上述的整合质粒或上述方法构建的整合质粒以及用于表达AAVRep蛋白的质粒共转染的，且能稳定表达BDD-FVIII的HEK293细胞。该细胞株可应用于生产人重组凝血因子VIII。本发明的优点包括：（1）避免了重组病毒构建及纯化过程，更简单易于操作，整合率高，且无重组病毒基因组的分子量限制，具有更广泛的应用性；（2）以人HEK293细胞作为宿主，表达的FVIII蛋白的结构与功能更接近于天然FVIII蛋白。