专利详情

专利名称	一种人重组白介素-3的表达纯化方法
申请号	CN201110009028.8	专利类型	发明专利
公开（公告）号	CN102146413A	公开（授权）日	2011.08.10
申请（专利权）人	中国科学院广州生物医药与健康研究院	发明（设计）人	吴东海;李洪波;金守光;徐爱民;李侍武
主分类号	C12N15/24(2006.01)I	IPC主分类号	C12N15/24(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I;C07K1/22(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I
专利有效期	一种人重组白介素-3的表达纯化方法至一种人重组白介素-3的表达纯化方法	法律状态	实质审查的生效
说明书摘要	本发明公开了一种高效表达人重组白介素-3(rhIL-3)的毕赤酵母转化子及其纯化方法，真核宿主为毕赤酵母X-33，主要包括以下步骤：克隆人IL-3基因；构建真核表达载体并转化其到真核酵母宿主中；通过筛选，得到高水平分泌表达的酵母转化子，酵母表达的IL-3存在糖基化和非糖基化的两种形式；利用摇瓶扩大培养，培养液上清经透析后经镍亲合纯化后再经DEAE阴离子柱进一步纯化，纯化产物进行了质谱鉴定分析，结果表明，表达出的IL-3是经不同糖基修饰的IL-3，该IL-3含有His×6标签和C-MYC标签，易于纯化和检测表达产。本发明改变了传统的用原核宿主表达rhIL-3，首次利用毕赤酵母表达系统大量表达rhIL-3的方法，通过His-tag标签蛋白得到快速纯化，纯化的rIL-3是经不同程度糖基化的分子量分别在19kDa和22kDa的高活性rhIL-3蛋白，本方法保证了快速获得高活性的rhIL-3重组蛋白。